高效液相色谱法的应用范围及流动相选用要求

点击次数：2407 发布时间：2019/6/13 19:49:25 下载资料

　　高效液相色谱仪的应用远远大于气相色谱仪。它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。

　　高效液相色谱法的应用范围

　　1 在食品分析中的应用

　　①食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸(邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等)、有机胺、矿物质等。

　　②食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂(合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等)、抗氧化剂等。

　　③食品污染物分析：霉菌毒素(黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等)、为了元素、多环芳烃等。

　　2 在环境分析中的应用

　　多环芳烃(特别是稠环芳烃)、农药(如氨基甲酸酯类，反相色谱)残留等。

　　3 在生命科学中的应用

　　HPLC技术目前已成为生物化学家喝医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的公开。其在生化领域中的应用主要集中于两个方面。

　　高效液相色谱仪流动相的选用要求

　　高效液相色谱仪流动相的选用要求包括流动相性质要求、流动相选择、流动相pH值、流动相脱气、流动相过滤、流动相贮存、卤代溶剂应特别注意的问题和HPLC用水等方面。

　　一、流动相性质要求：

　　HPLC中，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k值减小;较弱的溶剂使溶质在填料表面的吸附增加，相应的容量因子k值增大。因此，k值是流动相组成的函数。理论塔板数一般与流动相的粘度成反比。

　　1、流动相应不改变填料的任何性质：

　　低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

　　碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

　　酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。

　　2、纯度高：

　　色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

　　3、必须与检测器匹配：

　　当使用UVD时，所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。

　　当使用RID时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

　　4、粘度低：

　　高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质，使柱效降低，还会使柱压增加，分离时间延长。zui好选择沸点在100℃以下的流动相。

　　5、对样品的溶解度要适宜：

　　如果溶解度欠佳，样品会在色谱柱内沉淀，不但影响纯化分离，而且会使色谱柱恶化。

　　6、样品易于回收：

　　应选用挥发性溶剂。

　　a低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。

　　b该分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶的纯化、分离和测定。

　　4 在医学检验中的应用

　　主要应用于体液中代谢物测定、药代动力学研究及临床药物检测。

　　a 合成药物：抗生素、抗抑郁药物(冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等)、磺胺类药等。

　　b 天然药物：生物碱如吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心苷等。

　　5 在无机分析中的应用

　　包括阳离子、阴离子的分析等。