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点击次数:2698 发布时间:2015/1/8 14:57:46 下载资料
最近经常用到缓冲盐和离子对流动相,也时常发现色谱柱损坏。一般来说,缓冲盐和离子对流动相容易在色谱柱析出结晶,从而损坏色谱柱填料颗粒,对色谱柱造成不可修复的破坏。
使用完立即用高梯度水相冲洗,这是通常采用的方法。有的同仁甚至在样品测试的时候每隔几针样品就冲一下色谱柱。即使这样,仍然有很多色谱柱在使用过缓冲盐或者离子对流动相后,下次再用的时候发现柱效下降,前沿峰或者拖尾峰很严重。这是什么原因呢?下面我来分享一下我在使用过程中总结的经验。
色谱柱在正常使用的时候一般流动相中的无机盐不会析出,所以一直使用的色谱柱一般不会很快损坏。但是流动相中的无机盐会随着使用时间的增加而逐渐渗透到填充颗粒内部。当我们暂时不用色谱柱的时候,我们一般用30-60倍的柱体积冲洗色谱柱,然后置换成高梯度有机相,甚至全有机相保存。这个时候问题就出现了,30-60倍的柱体积能把填充颗粒表面的无机盐冲洗干净,而渗透到颗粒内部的无机盐则可能没有冲出来。在高梯度甚至全有机相保存的时候,这部分无机盐很可能析出结晶,对色谱柱填充颗粒造成损坏。
针对这个问题,试验过很多色谱柱。在这过程中发现,冲洗色谱柱以后把色谱柱保存在50-60%的有机相中能有效的改善填充颗粒内部无机盐析出的问题。50%左右的有机相能溶解一部分无机盐,也不容易长微生物,而且有机相和水相的混合保存液相比纯有机相更不容易挥发,有效的防止色谱柱干涸。
自从采用上述方法以后实验室使用无机盐流动相的色谱柱寿命有了明显提高。希望该方法能帮到各位同仁。
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