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液相色谱仪串联质谱的检测流程方法总汇

点击次数:619 发布时间:2020/1/7 17:53:12

如今蛋白组/代谢组学被广泛应用于生命科学领域,液相色谱仪串联质谱技术(液质联用)是蛋白组/代谢组学研究的主要手段,因此液质联用受到了医学科学的极大重视。那么今天就来了解一下液质联用的基本流程吧!

 

液相色谱仪

 

液相色谱部分由进样系统、输液系统、分离系统三个部分组成

(1)进样装置要求密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。

(2)输液系统最为主要的是梯度洗脱装置——有两种方式:一种称低压梯度,指常压下溶剂按一定比例混合后再由高压泵输入色谱柱,又称外梯度;另一种称高压梯度,指先用高压泵将各溶剂输入混合器混合,再送入色谱柱,也称为内梯度。

(3)分离系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。与单纯LC相比,LC-MS一般流速较低(高流速可能影响雾化效果),所以一般用窄径柱,即2 mm或2.1mm的,粒径一般为3.5μm,也有1.7μm的。

 

液相色谱仪

 

液相色谱仪分析的一般流程

(1)ESI电离:其工作原理是将液滴变成蒸汽,产生离子发射的过程中形成的溶剂由液相泵输送到ESI Probe,经其内的不锈钢毛细管流出,这时给毛细管加2-4 kv的高压,由于高压和雾化气的作用,流动相从毛细管顶端流出时,会形成扇状喷雾,使液滴生成含样品和溶剂离子的气溶胶。ESI属于最软的电离方式,通常只产生分子离子峰。适合热不稳定的极性分子,能分析小分子及大分子。

(2)四极杆质量分析器:四极杆内所包围的空间存在双曲线形电场。从离子源入射的加速离子穿过四极杆中的电场会受到电场作用,只有选定的m/z离子以限定的频率稳定的通过四极杆质量分析器,其他离子则碰到极杆上被吸滤掉,不能通过,即达到“滤质”的作用。四极杆质量分析器结构紧凑,体积小,扫描速度快,适用于LC-MS联用仪。

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