(1)在柱内沉积乙酸铵等缓冲溶液盐；

（2）样品污染沉积；

解决方法：

对于第一种情况，柱子在40-50℃下用纯水洗涤，低速正向冲洗。当塔压逐渐降低时，流速随之增加。柱压显著降低后，在室温下用纯水冲洗柱子，然后用纯甲醇冲洗柱子30分钟。

在第二种情况下,样品的污染造成的存款使用C18柱,和水反洗柱,甲醇洗,然后用甲醇+异丙醇(4 + 6)冲洗柱子,再用甲醇洗,然后以清水洗净即可,甲醇洗是洗列超过30分钟。

2. 指示

可能原因：

(1)泵密封垫片磨损；

(2)大量气泡进入泵体。

解决方法：

对于第一种情况，更换密封垫；对于第二种情况，在泵的出口处使用50毫升玻璃注射器以帮助泵工作时抽出空气。

3. 不稳定

可能原因：

宝石球与系统中的空气座或单向阀之间有异物，因此两者不能密封。

解决方法：

应注意观察处理过程中流动相的数量，以确保不锈钢过滤器沉入贮液瓶底部，以避免吸入空气，移动相应完全脱气。如果异物夹在单向阀和阀座之间，则拆卸单向阀并将其放置在装有丙酮的烧杯中进行超声波清洗。

4. 峰分叉

可能原因：

（1）色谱柱被污染；

（2）柱头填料塌陷；

解决方法：

对于第一种情况，先用纯水反洗，然后用甲醇代替，然后用甲醇+异丙醇(4+6)清洗(洗涤时间的长短取决于样品的污染程度)，然后用甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，然后用甲醇直接冲洗柱30分钟以上。如果清洗后的峰值仍不佳，则考虑第二种情况。

对于第二种情况，松开柱子以检查填料是硬的还是塌陷的。拆卸硬化部分(受污染的填料)，加入新填料，滴下一滴甲醇，沉淀，填充，用与柱直径相同的光滑顶部不锈钢棒压榨，填充，滴下甲醇，再按几次直到填充。用甲醇冲洗汽缸，擦拭柱外壁的填料，拧紧汽缸，用纯甲醇冲洗30分钟以上。

5. 重复性差

可能原因：

（1）进样阀漏液；

（2）加样针不到位；

（3）液量不足；

解决方法：

对于第一种情况，更换注射阀垫圈。

第二个病例是确保针最后,样品溶液注入后必须快速、顺利从负载状态转换注入条件,确保数量的样本的准确性。

此外，在日常工作中，保持液相色谱仪是非常重要的：

(1)小心不要让空气进入输液系统和高压泵。如果储集层中的溶液长期不使用，则应进行清洗和更换，每次使用色谱仪后，必须用纯净水冲洗缓冲液，以防止无机盐的沉淀或沉淀；

（2）样品前处理也是非常重要的。任何样品都应尽可能除去杂质，完全溶解，并尽量减少色谱柱的污染，从而延长色谱柱的使用寿命，同时避免注入过浓的样品溶液，从而避免堵塞色谱柱。由样品阀内残留液体的固体沉淀作用；

(3)色谱柱应贴上标签，用于不同分析目的色谱柱不应混合等。

6.其他原因和解决办法

故障类型的可能原因的解决方案

基线噪声大

随机性.污染物堆积洗涤柱.净化样品.hplc级溶剂

连续检测灯故障更换紫外线灯（寿命1000小时）

机会——使用特殊的稳定器LC系统外部的电子干扰

样品大小应为流动相样品大小的1/6。

双峰

样品大小应为流动相样品大小的1/6。

弱注入溶剂或流动相的过度使用

具有0.5μm孔隙度的在线过滤器，由过滤元件堵塞代替

填充用玻璃珠或填料填充；填充一栏。

在更换取样器转子时，取样器的流道不平坦。

柱顶充满填料或玻璃珠的柱顶。

使用较高固定相负载的柱上样品过载增加了柱直径并减小了样品体积

单峰,破坏蛋白质纯化样品,初步分离

拖尾峰

开始出双峰请参见双峰

未扫死体积的存在减少了接头的数量，以确保喷油器垫圈紧固，以确保接头是正确固定的。

聚合物固定相取代碱性化合物及硅醇相互作用

碱-硅醇相互作用使用更强的移动相或添加竞争性碱(例如，三甲胺)

硅胶基柱-用特殊色谱柱降解；聚合物柱或立体电阻

峰展宽

降低样品注入溶剂的强度，浓缩溶质。

注入阀中的峰值扩散通过在注入前后引入气泡来减少扩散

数据系统采样率过低与采样率提高

检测器时间常数与峰值宽度匹配的低调节时间常数

流动相温度高粘度增加列

探测器电池体积太大，不能用得越小越好(系统中没有热交换器)。

注射器体积过大，无法减少注射量

使用梯度洗脱或强流动相保留长时间

压力波动

单向阀泄漏更换单向

泵密封垫片泄漏更换

颗粒堆积过滤样品在线过滤流动相

压力渐增

颗粒堆积过滤样品在线过滤流动相

水/有机体系.缓冲沉淀试验缓冲器.有机混合物

保留超出总渗透体积

通过添加流动相改性剂或改变溶剂，体积排除特异性相互作用

保留时间不断变

动态柱温度改变柱温度;绝缘材料;确保实验室温度恒定

平衡时间不足以满足梯度洗脱要求，或等距洗脱流动相变化，以确保至少10个柱体积通过色谱柱后，溶剂变化或梯度末端。

选择性蒸发流动相组分以减少氦的强烈脱气；保持溶剂贮器的覆盖；制备新的流动相

缓冲液浓度大于20mM时，缓冲容量不足。

在线流动相混合不一致，以确保梯度系统的恒定组成；手动准备流动相检查

污秽堆积冲洗柱去除污染物

前几次进样-吸附在活性部位用浓缩样品清洗柱，使其处于正常状态。

保留时间逐渐缩短

流量在增加，以检查泵是否正确；否则，必须重新设置。

柱上进样超载减少样品

键合固定相的损失使流动相的pH值保持在2～8.5之间。

保留时间逐渐增加

速度慢解决泄漏的液体流动现象,更换泵密封,检查泵的涡流和泡沫

硅胶填料活点流动相改性剂的应用

键合固定相的损失使流动相的pH值保持在2～8.5之间。

流动相组成发生变化，保证了流动相容器的封盖良好。

活性点硅胶填料流动相竞争碱的研究

硅胶填料活点固定相覆盖度高的填料

灵敏度问题

在探测器的线性范围以外稀释或浓缩，使其处于线性范围。

初始取样-样品被吸附在样品池或柱中，自动取样器的流动路径被浓缩的样品处理单元/柱堵塞。

自动取样器流路堵塞检查流速情况，确保无堵塞现象

定量取样器取样管不充满,以确保样品池中的完整的样品

采用内标法制备样品，优化样品制备方法。

柱平衡时间减慢(离子对现象)

长链离子对试剂平衡时间慢用短链烷烃试剂